Clark 改良 Bodian 法神经组织染色试剂盒

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‍Clark 改良 Bodian 法神经组织染色试剂盒

产品及特点 Bodian 染色法是美国科学家 David Bodian 1936 年首创的用于观察神经元、 轴突和树突内神经原纤维的浸银染色法，其工作原理是把石蜡切片浸于银溶液中 , 再用还原液使银颗粒沉积于神经纤维上并呈棕色或棕黑色。传统 Bodian 法的染色 是在 37℃进行，Clark 改良法将温度改为 60℃，本试剂盒即根据改良方法开发， 跟具有下列特点：

1. 一站式，用户不需要单独购买和配制各种溶液。

2. 降低了背景色深，减轻了血管和胶原纤维的共染现象，便于观察神经纤维。

3. 染色和还原时间更短，降低了脱片现象。

4. 本试剂盒可用于细胞涂片、切片和实体组织的显色检测。

5. 产品稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀。

6. 本规格足够进行 100 次切片的染色（不含切片制备和脱蜡封固等试剂），本产 品只能用于科研。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂 蒸馏水、载玻片、显微镜
使用方法 一：准备工作
1. 配制蛋白银溶液（以配制 10mL 为例，足够 10 张切片）：在干净的培养细菌的玻璃培养皿中加入 10mL 蒸馏水，再将蛋白银研磨成粉，称取 0.1g 然后慢慢抖入到培养皿中，让蛋白银干粉在静止状态下缓慢溶解进入水中，期间不要摇晃，直到彻底溶解。蛋白银溶液必须现配现用。
2. 配制还原液（以配制 10mL 为例，足够 10 张切片）：称 0.5g 还原液成分一和0.1g 还原液成分二，加自备蒸馏水 10mL 溶解即可。此溶液不能保存后再使用，必须现配现用。本试剂盒提供的 10mL 试剂瓶可以反复使用。
3. 配制氯化金 1%溶液：在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水，再加入 1g 氯化金溶解待用。
4. 配制草酸溶液：在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水，再加入 2g 草酸溶解待用。
5. 配制固定液：在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水，再加入 5g 固定剂溶解待用。
二、切片的染色
6. 固定组织并制备厚度为 10-15um 的切片。制备切片时最好使用 Bodian 专用固定液（甲醛原液 5mL、冰乙酸 5mL、80%乙醇 90mL），但本染色法也跟其他常用的各种固定液兼容。本试剂盒不提供固定液。
7. 将切片脱蜡至水。
8. 在 Coplin 染色缸中加入 10mL 蛋白银溶液，然后加入一张新鲜处理的铜箔（处理方法：在干净的培养细菌的玻璃培养皿中加入 7mL 水和 3mL 自备硝酸，混匀，用镊子将一片铜箔（约 0.5g）浸入到硝酸溶液中，硝酸溶液将去其表面的氧化层，当铜箔表面变成金黄色时用镊子取出铜箔并迅速用自来水冲洗干净，折叠到适当大小并放入到装有蛋白银溶液的 Coplin 染色缸底部），然后放入切片，将染色缸密封后放 60℃温箱内染色 4~16 小时（或 37℃24-48 小时）。如果选择 60℃染色，最好每 1 小时肉眼检测一次，当切片呈金棕色时即停止染色。如染色时间太短，只有较粗的纤维可被轻微的染上，如果染色过头会产生过深背景。
9. 在蒸馏水内稍洗一下，把附着在载玻片和切片表面的染料去掉。洗的时间不宜太长，否则会把染色去掉，只留下已被浸染的粗纤维。
10. 在新制备的还原液中还原 2-3 分钟。
11. 用蒸馏水彻底洗去还原液。
12. 在 1mL1%氯化金溶液加 1.5uL 冰乙酸，混匀。将切片放入此 1%氯化金溶液中调色 10 分钟。
13. 用蒸馏水洗净。
14. 如果此时切片呈淡紫色或蓝色则跳过此步，如果还不呈淡紫色，则将切片放入到草酸溶液中 2-5 分钟，直到切片呈浅紫色或蓝色时取出。
15. 用自来水冲洗切片 5 分钟。
16. 将切片放在固定液中固定 5 分钟。
17. 自来水洗净切片。
18. 对切片进行梯度酒精脱水、二甲苯透明和中性树胶封固（本试剂盒不含相关试剂）。
19. 显微观察切片：轴突、神经元纤维将呈现黑色或紫黑色。

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