过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒（钼酸铵法）微量法

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书（钼酸铵法）

 微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶试剂二加入 12.5mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂 4℃保存一周。

2、 30μmol/mL 标准液的配制：标准品置于试剂瓶内 EP 管中，使用前需先离心。本试剂盒所提供标准品为1mmol/mL H₂O₂标准溶液，临用前取 0.15mL 标准品加入 4.85mL 试剂一稀释或者根据样本量按照比例配制，充分混匀，即为 30μmol/mL 标准液，现配现用。

产品说明：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H₂O₂清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H₂O₂可与钼酸铵反应形成稳定的黄色复合物，在 405nm 处有强烈吸收峰，且其吸光值大小与过氧化氢浓度成正比。通过测定反应体系中剩余的 H₂O₂量，得出被 CAT 催化分解的 H₂O₂量，进而反映 CAT 的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，超声 3s，间隔 9s，重复 30 次）；8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

b、组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(V)=1: 5~10（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。

2、 测定前将 30μmol/mL 标准液与试剂一在 25℃水浴 10min 以上。

3、 加样表：

三、CAT 活性计算

注意事项：

1. 本试剂盒多给出 25mL 的提取液，供样本稀释使用。

2. 如果反应液有大量气泡产生，将样本用提取液稀释后再进行测定。

3. 如果样本量过多，为保证反应时间（25℃，10min）的准确性，建议分成若干批次检测，每批次检测均需配 1-2 个空白管与标准管。

4. 当 A 测定小于 0.12 或者约等于 A 对照时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

5. 动物组织如肝脏、肾脏等酶活性较高样本，预实验建议将样本用提取液多个高倍稀释（如 25 倍、50 倍、100倍、200 倍等）试验后，再进行检测。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清用提取液稀释 200 倍后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 标准=A 标准-A 空白=0.939-0.104=0.835，ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.179-0.104=0.075，ΔA=ΔA标准-ΔA 测定=0.835-0.075=0.760。按样本质量计算酶活得：

CAT 酶活(U/g 质量)=15×（ΔA÷ΔA 标准）÷W×F=15×（0.76÷0.835)×200÷0.1=27305.39 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！