多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒 可见分光光度法

多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；

2、 试剂二：临用前加入 8 mL 蒸馏水，60℃水浴助溶；

3、 标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 蒸馏水，配成 50 μmol/mL 的标准液。

产品说明：

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。

PG 水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定 540 nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，16000 g，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000︰1的比例（建议 500 万个细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 5 min）；然后 4℃，16000 g，离心 10 min 取上清置于冰上待测。

液体：直接检测或用提取液稀释后检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 540 nm，蒸馏水调零。

2、 将 50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、6、4、3、2、1.5、1.2 μmol/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表：(在 1.5mL 离心管中)

三、PG酶活计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（μmol/mL）

2、 PG 酶活的计算：

（1）按样本蛋白浓度计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每毫克蛋白每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T = 0.5x÷Cpr

（2）按样本质量计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每克样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/g 质量）= x×V 提取÷W÷T = 0.5x÷W

（3）按照细菌数量计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每 10⁴个细菌每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/10⁴ cell）= x×V 提取÷T÷细菌数量（万个）= 0.5x÷细菌数量（万个）

（4）按液体体积计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每 mL 样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/mL）= x×V 样÷V 样÷T＝0.5x

V 提取：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 样：反应体系中样本体积，0.05 mL；T：酶促反应时间，2 h。

注意事项：

1、 样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、 当 A 大于 1.2 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数。

3、 植物果实组织建议将样本稀释 10 倍或 20 倍后再测定。

4、 若样本 ΔA 值偏小，建议延长酶促反应时间，并在计算公式中除以相应时间。

实验实例：

1、 取 0.1g 鲜梨加入 1mL 提取液冰浴匀浆后于 4℃，16000 g，离心 10 min，取上清稀释 5 倍后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.912-0.882=0.03，带入标准曲线 y=0.1127x-0.1207，计算得 x=1.337，按样

本质量计算：

PG 酶活（U/g 质量）= 0.5x÷W×5（稀释倍数）=33.43 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！