纤维素酶(CL)活性检测试剂盒 可见分光光度法

纤维素酶（CL）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

标准品：10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃可保存两周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

产品说明：

CL（EC 3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

采用3,5-二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、低温离心机，可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声冰浴破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、标准品稀释表：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。

实验中每个标准管需50μL标准溶液。

3、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

三、CL活力计算

1、标准曲线的建立：

根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度 ΔA 标准（x，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将 ΔA

测定（x，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。

2、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/mg prot）＝1000×y×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T=233×y÷Cpr

3、按样本质量计算

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/g 质量）＝1000×y×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T =233×y÷W

4、按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/10⁴ cell）＝1000×y×V 反总÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.467×y

1000：单位换算系数，1mg/mL=1000μg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.35mL；V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！