脂肪酶(LPS)活性检测试剂盒 可见分光光度法

脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

标准品：临用前加入 1.435 mL 无水乙醇配成 125 μmol/mL 的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。

产品说明：

LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本：称取约0.1g样本，加试剂一1.0 mL充分研磨，于4℃，15000rpm离心30min，取上清液待测。

血清样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2、 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min 以上。

3、 标准溶液的稀释：将125 μmol/mL的油酸标准溶液用无水乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9μmol/mL的标准溶液待测。

4、 操作表：

反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10min，小心吸取上层溶液 800μL，加入 1mL 玻璃比色皿，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管，计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、LPS活性计算

1、标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。

将ΔA测定带入方程，得到x（μmol/mL）。

2、酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算：

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =x×V样÷（Cpr×V样) ÷T= 0.1×x÷Cpr

（2）按样本质量计算：

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g 质量) =x×V样÷（W×V样÷V提) ÷T= 0.1×x÷W

（3）按血清计算：

活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x

V样：加入反应体系中上清液体积，0.2mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；T：催化反应时间，10min；W：样本质量，g；V提：提取液体积，1mL。

注意事项：

1、 甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、 实验过程中须远离火源。

3、 当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。

实验实例：

1、 取 0.1g 胰腺组织加入 1mL 试剂一匀浆研磨，取上清，之后按照测定步骤操作，测定后计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.811-0.112=0.699，标准曲线 y=0.0074x，则 x=0.699÷0.0074=94.459，按样本质量计算酶活得：

LPS (U/g 质量) =0.1×x÷W=0.1×94.459÷0.1=94.459 U/g 质量。

2、 取 0.1g 红叶石楠加入 1mL 试剂一匀浆研磨，取上清，之后按照测定步骤操作，测定后计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.131-0.112=0.019，标准曲线 y=0.0074x，则 x=0.019÷0.0074=2.568，按样本质量计算酶活得：

LPS (U/g 质量) =0.1×x÷W=0.1×2.568÷0.1=2.568 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！