胃蛋白酶活性检测试剂盒 紫外分光光度法

胃蛋白酶活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液。10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至275nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：

注意：对照管后加样本，而测定管先加样本

三、 胃蛋白酶活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T=0.786×?A÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T=0.786×?A÷W

3、按液体体积计算

 活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

胃蛋白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T=7.86×?A

Cpr：样本蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，1.1mL；V 提：提取液体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.1mL；ε：酪氨酸吸光系数，1.4mL/μmol/cm；d：光程，1cm；V 液：液体体积，0.1mL。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠胃加入 1mL 提取液充分研磨，10000rpm 4℃离心 10 分钟，取上清稀释 2 倍，置冰上，按照测定步骤操作，测得计算?A=A 测定-A 对照=1.234-1.199=0.035，按样本质量计算酶活得：胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=0.786 ×?A ÷ W × 2（稀释倍数）=0.5502 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！