酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明:
ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。
酸性条件下,ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm 有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算 ACP 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、1.5mL EP 管、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称约0.1g组织,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。
3、 标准溶液的配制:临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用,现用现配。
三、ACP活性计算
1、按样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
ACP 酶活(U/mg prot)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1÷(Cpr×V2)÷T
=0.125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活单位定义:30℃每克样本每分钟催化水解产生 1 μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
ACP 酶活(U/g 质量)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1÷(W×V2÷V3)÷T
=0.125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准品:0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液; Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V1:酶促
反应总体积,0.5mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,0.1mL;V3:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min。
注意事项:
若反应较弱,即(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。
实验实例:
1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上,之后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定管=0.537,A 对照管=0.481,A 标准管=0.39,A 空白管=0.005,按样本质量计算酶活得:
ACP 活性(U/g 质量)=0.125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W=0.182 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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企业名称
上海博尔森生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310117MA1J4K3L3L
成立日期
2020-09-02
注册资本
100
经营范围
一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)
上海博尔森生物科技有限公司
公司地址
松江区石湖荡镇石湖新路95号
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