组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒 可见分光光度法

组织及血液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书

 可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、标准品：10 μmol/mL 酚标准液，临用前蒸馏水稀释至 2.5μmol/mL 备用。

产品说明：

ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用于前列腺癌的辅助诊断。在酸性环境中，ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510nm 吸光度增加速率，来计算 ACP 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本称取约 0.1g 组织，加提取液 1mL 充分研磨，4℃，10000rpm 离心 10min，取上清液待测。

血清（血浆）：血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 510nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置于 37℃水浴中预热 30min 以上。

3、操作表：

三、ACP 活性计算

1、按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T

 =0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/g 质量)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷(W÷V 提取×V 样)÷T

 =0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

3、按血液体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T

 =0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

C 标准品：标准品浓度，2.5μmol/mL；V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；T：反应时间，15min；V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。

4、ACP 不稳定，尤其在 37℃和 pH 大于 7 的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样本一般需当天准备；血清样本中，每毫升血清中加入 10mg 柠檬酸氢二钠或者 5mg 硫酸氢钠，使 pH 降至 6.5 以下，或 5mL 血清加入 30%醋酸溶液 2～3 滴，置于 4℃可保存 1 周。

实验实例：

1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 A 测定管=0.572、A 对照管=0.021、A 空白管=0.007、A 标准管=0.496，按样本质量计算酶活：

ACP 酶活（U/g 质量）=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W =0.167×（0.572-0.021）÷（0.496-0.007）÷0.1=1.882 U/g 质量。

2、 取 0.1g 三叶草叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 A 测定管=0.074、A对照管=0.023、A 空白管=0.007、A 标准管=0.496，按样本质量计算酶活：

ACP 酶活（U/g 质量）=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W =0.167×（0.074-0.023）÷（0.496-

0.007）÷0.1=0.174 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！