总胆固醇(TC)含量检测试剂盒 可见分光光度法

总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：自备异丙醇，4℃保存。

2、 标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入 517 μL 提取液，振荡溶解，即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液。

3、 试剂三：液体置于试剂瓶内 EP 管中。

4、 工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三按 3 mL：20 μL：3 μL 的比例配制工作液，现用现配。

产品说明：

总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成4-胆甾烯酮和H₂O₂；最 后利用过氧化物酶催化 H₂O₂氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。

技术指标：

最 低检出限：0.056 μmol/mL

线性范围：0.078-2 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、天平、低温台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、EP管、蒸馏水、异丙醇。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2、细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.血清（浆）样本：直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2. 将50μmol/mL标准液用提取液稀释为2、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：（在1.5ml离心管中依次加入下列试剂）

三、总胆固醇含量计算

1. 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程得到x（μmol/mL）。

2. 总胆固醇含量的计算：

（1）按血清（浆）体积计算：TC含量（μmol/dL）=x×100

（2）按样本蛋白浓度计算：TC含量（μmol/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr

（3）按样本质量计算：TC含量（μmol/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W

（4）按细胞、细菌数量计算：TC含量(μmol/10⁴ cell)=x×V提取÷500=0.002x

100：单位换算系数，1dL=100mL；V提取：加入样本的提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

注意事项：

1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2、 用提取液提取后的上清不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白浓度，需另取组织。

实验实例：

1、 取鸡血浆样本，直接按照测定步骤操作，测得计算 ΔA=A 测定管-A 空白管=0.083-0.012=0.071，根据标准曲线 y

=0.6686x-0.035，计算 x=0.1585，按血清（浆）体积计算得：

TC 含量（μmol/dL）=x×100=0.1585×100=15.85 μmol/dL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！