漆酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060203305881042](http://bioesn.net/upload/ueditor/image/20220602/2022060203305881042.png)
溶液的配制:
1. 工作液的配制:一瓶试剂二用 25 mL 试剂一溶解。现用现配。
产品说明:
漆酶(CE1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一种环保型酶,其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基,在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS,测定ABTS自由基的增加速率,可计算得漆酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水,水浴锅
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。
3、培养液:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 420nm,蒸馏水调零。
2、 水浴锅温度调至 45℃。
3、 操作表:在 1mL 玻璃比色皿中分别加入下列试剂:
![image 2022060203313689268](http://bioesn.net/upload/ueditor/image/20220602/2022060203313689268.png)
三、漆酶活计算
1、按蛋白浓度计算
酶活定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶酶活(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×Cpr)÷T=61.7×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义:每克样本每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶酶活(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×W÷V 样总)÷T=61.7×ΔA÷W
3、按细胞数量计算
酶活定义:每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶酶活(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×500÷V 样总)÷T=0.123×ΔA
4、按液体体积计算
酶活定义:每 mL 液体每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶酶活(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷V 样÷T=61.7×ΔA
ε:ABTS 摩尔消光系数:36000L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.001L;V 样:反应中样本体积,0.15mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度需自行测定;W,样本质量,g;T:反应时间,3min;500:细胞总数,500 万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
注意事项:
1、工作液需临用前配制,并且尽快使用,4℃保存一周,若变色则不能使用。
2、测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样本用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,OD 值变化不超过 0.05。
实验实例:
1. 取 0.1g 香菇加 1mL 提取液进行样本处理,取上清后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定管=A2 测定-A1 测定=0.657-0.084=0.573,ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.087-0.058=0.029,ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.573-0.029=0.544,按样本质量计算酶活得:
漆酶酶活(U/g 质量)=61.7×ΔA÷W=61.7×0.544÷0.1=335.648 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
漆酶活性检测试剂盒 可见分光光度法信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于漆酶活性检测试剂盒 可见分光光度法报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应漆酶活性检测试剂盒 可见分光光度法外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供CD142; FIII; F3; TFA;大鼠组织因子(TF) ELISA Kit、大鼠左右决定因子1(LEFTY1) ELISA Kit;LEFTYB试剂盒、CTSL1; CATL; CTS-L; MEP;大鼠组织蛋白酶L(CTSL) ELISA Kit等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。