细胞转染试剂（阳离子聚合物法，非脂质体）

产品概述

阳离子聚合物细胞转染试剂采用专利配方的阳离子聚合物为主要成分，其高度的分支结构确保了高正离子电荷密度，使得与带有负电荷的外源基因结合更有效，容易被细胞吸收，排斥少，因此能显著提高外源基因的转染效率，适合多种类型的细胞系，细胞存活率高，可以广泛用于瞬时转染和稳定转染。阳离子聚合物细胞转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有较高的转染效率，较好的重复性，且操作简以及单细胞毒性较小，可用于贴壁细胞和悬浮细胞，与Lipo2000 Reagent相似。该转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最jia的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。 外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。目前常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们容易透过细胞膜，其中阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，在体内它迅速被血清清除，会肺组织内累积诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃保存

注意事项

注意微生物污染

有效期

一年

使用注意事项

1. 注意无菌操作，尽量避免污染。

2. DNA不应含有蛋白和酚。

3. 为了取得较高的转染效率，推荐使用在50代以内的细胞进行转染，转染前细胞必须处于良好的生长状态。

4. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保OD260/OD280≥1.8.

5. 该转染试剂不应涡旋或离心，宜缓慢晃动混匀。

6. 在体外细胞转染实验中，可通过预实验在转染试剂：DNA（ug）=2:1~6:1之间选择最jia比例。

7. 影响转染效率的因素很多，如细胞类型、细胞状态及密度、DNA/siRNA转染量、转染试剂与DNA/siRNA比例等，应再具体实验中优化最jia的转染条件。

使用方法

DNA转染（以12孔板为例）：

1. 在转染前18~24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的12孔板中，并将细胞培养板置于37℃ 5% CO2培养箱培养，待细胞密度大70～90%满时即可进行转染。后续操作步骤均按12孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2. 在加入待转染的DNA之前2～4h，加入1ml不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO2培养箱培养。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。

3. 配制染色工作液：取2个无菌离心管，分别加入50ul不含抗生素和血清的培养液，取其中一离心管加入1.6~3ugDNA，轻轻混匀；取另一离心管加入3ul转染试剂，轻轻混匀。室温静置5min，将含有DNA的培养液用微量移液器轻轻加入含有转染试剂的培养液中，轻轻吹打混匀，室温静置20min。

4. 将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37℃ 5% CO2培养箱培养中培养。

5. 培养4~6h后，更换为含有血清的完全培养液。对于Hela细胞，推荐在转染4h更换培养液；对于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 细胞，推荐在转染6h更换培养液。

6. 继续培养24~48h后，观察或收集细胞或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。

（二）siRNA转染（以12孔板为例）：

1. 在转染前18~24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的12孔板中，并将细胞培养板置于37℃ 5% CO2培养箱培养，待细胞密度大50～80%满时即可进行转染。后续操作步骤均按12孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2. 在加入待转染的siRNA之前2～4h，加入1ml不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO2培养箱培养。 也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。

3. 配制染色工作液：取2个无菌离心管，分别加入50ul不含抗生素和血清的培养液，取其中一离心管加入40pmol siRNA，轻轻混匀；取另一离心管加入2ul转染试剂，轻轻混匀。室温静置5min，将含有siRNA的培养液用微量移液器轻轻加入含有转染试剂的培养液中，轻轻吹打混匀，室温静置20min。

4. 将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37℃ 5% CO2培养箱培养中培养。

5. 培养4~6h后，更换为含有血清的完全培养液。对于Hela细胞，推荐在转染4h更换培养液；对于NIH3T3、 CHO、 HEK293T和 HEK293FT 细胞，推荐在转染6h更换培养液。

6. 继续培养24~48h后，观察或收集细胞。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！