内质网提取试剂盒

产品概述

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。 内质网提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网的提取。 本试剂盒适用于各种粗面内质网和光面内质网的提取。 本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。 本试剂盒需要使用高速离心，没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.提取液长期不用时置于-20℃保存，15天内要多次使用的话置4℃保存即可。

2.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

提取

适用样本

动物细胞/组织

产品应用

根据需要使用

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3.zui好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是内质网回收率可能会下降。

4.要求离心力50000×g的离心，没有条件的话可以采用30000×g -50000×g离心力，zui好能达到45000×g左右。最小离心力需要保证30000×g。

5.如果需要回收所有光面内质网小泡，zui后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。

6.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

使用方法

细胞内质网提取：

1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。

4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。

5. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。

6. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。

8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。

9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。

10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。

11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织内质网提取：

1. 取50 mg -100 mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。

4. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6. 在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。

8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。

9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。

10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。

11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！