酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）

产品概述

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取线粒体膜蛋白。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒不能用于冷冻样品的线粒体膜蛋白提取。 本试剂盒提取的蛋白样本不含有盐成分，可直接用于等电聚焦、2D电泳，如需要用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用其他货号的试剂盒。。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

双向电泳

适用样本

酵母

产品特点

1、 使用方便。

2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

双向电泳

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法

1. 酵母培养物，在4℃，5000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

2. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 每100ul体积酵母沉淀物中加入400ul酵母线粒体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

4. 5000g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。

5. 用PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。

6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母线粒体提取液B，混匀后，在37℃或室温条件下轻微振荡45-120分钟。

7. 在5000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。

8. 沉淀用PBS洗涤两次。离心收集沉淀。

9. 沉淀中加入500μl酵母线粒体提取液 C，充分混匀，然后在振荡器上轻轻振荡20-40分钟。

10. 高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，500g条件下离心3分钟。

11. 将上清吸入另一干净离心管，收集上清，弃沉淀。

12. 在4℃，11000g条件下离心20分钟。

13. 弃上清，在沉淀中加入200-400μl冷的线粒体膜蛋白提取液D，混匀。

14. 在4℃条件下轻轻振荡20-30分钟。

15. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

16. 将上清吸入另一干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白约为20-50μl。

17. 小心移除上层，留下下层即为线粒体膜蛋白。

18. 用50-100ul膜蛋白溶解液E溶解下层，即得到酵母线粒体膜蛋白样品。

19. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！