大肠杆菌蛋白提取试剂盒

产品概述

大肠杆菌总蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取总蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。根据不同菌种盒不同的培养情况，每毫升菌液大概可以提得5-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法进行蛋白定量。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

大肠杆菌

产品特点

1.使用方便：不需昂贵设备。

2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

1. 提取液的准备：

根据所需要提取的样本量，每500 μl提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物和5 μl蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。

2. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集 菌体。

3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

4. 按每50-100 mg湿重菌体样本加入500 μl蛋白提取液，充分混匀，振荡20-30分钟，

5. 在150 W-300 W，10 s超声/10 s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。

6. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心15分钟，将上清移入冷的干净离心管。

7. 即得到大肠杆菌总蛋白样品。

8. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！