细胞膜蛋白提取试剂盒

产品概述

细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白，提取的膜蛋白纯度高，不含核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的膜蛋白保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。 本试剂盒提取的膜蛋白为细胞的总膜蛋白，需要单独的细胞器膜蛋白提取，请选用其他货号的试剂盒。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.提取过程简单方便。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

1. 提取液制备：

每200 μl蛋白提取液A中分别加入2 μl蛋白提取液B 和2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 在细胞沉淀中加入200-400 μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡5秒，置2-8℃条件振荡30分钟-1小时。

5. 然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟，收集上清，弃沉淀。

6. 将上清吸入另一干净离心管，置37℃水浴10分钟。然后在37℃，500×g力离心2分钟。

7. 此时溶液分为两层，小心移除上层，留下管底部下层大约20-50 μl液体。

8. 用30-100 μl膜蛋白溶解液C溶解该液体，即得膜蛋白样品。

9. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！