细胞外酸化检测试剂盒

产品概述

细胞外酸化率（ECAR）检测试剂盒（Extracellular acidification Rate Assay Kit）是利用合成的酸化检测荧光探针P61来检测细胞外酸化情况变化的试剂盒。可以通过简单的混合基于荧光酶标仪便捷的直接进行细胞外酸化情况的动态实时测定。 细胞外酸化（Extracellular Acidification ；ECA）测量可以为糖酵解（glycolytic）活性研究提供丰富的信息，本试剂盒可用于代谢表征并确定具体的干预措施（如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控）如何影响糖酵解通量。 细胞代谢与癌症、心血管疾病、神经退行性疾病、肥胖、糖尿病及干细胞等多个领域息息相关。糖酵解是真核细胞中的关键代谢途径，在分化、增殖和 ATP 生成等生理过程中起重要作用。糖酵解的改变对多种疾病也具有重要意义，包括但不限于癌症、心血管疾病和代谢疾病。 能量代谢指标胞外酸化率（ECAR）可帮助研究人员更多地了解细胞对外界的应激反应和运作机制。但以往细胞代谢的检测技术存在较多限制，例如难以对细胞代谢进行连续、实时的检测；一些专门检测细胞代谢的仪器、硬件贵，试剂耗材消耗成本高，实验重复性低且只能检测有限指标。 与传统的终点糖酵解分析不同， 使用P61糖酵解分析可以实时测定细胞外酸化率 (ECAR)，可以观察糖酵解机制的短暂变化和快速反应。样品不需要密封处理，在这些条件下， ECAR 是一种可靠且稳定的糖酵解活性测定方法。 P61细胞外酸化分析可以实时测量细胞糖酵解活性，是以高通量形式来评估用于代谢表征的细胞呼吸以及评估治疗对细胞功能毒性作用的一种可靠方法。 它可以使用荧光酶标仪在标准微孔板上进行简单动力学测定。随着糖酵解作用的进行，丙酮酸转化为乳酸，这将导致细胞外环境 pH 降低。P61探针可以灵敏地检测到 pH 降低，并表现为BcellProbe® P61探针荧光信号增加，从而实现对ECAR的测定。 P61最da激发波长为 488nm，最da发射波长为 580nm。其荧光在碱性条件下强度较弱，反之酸性条件下变强，从而 P61可被用于监测细胞外酸化的变化。在测定中，细胞外酸化率由荧光信号随时间的变化计算。细胞外酸化增加，荧光信号的变化率增加；反之，酸化减少，荧光信号的变化率降低。  P61与乳酸的这种反应是非破坏性且完全可逆的，P61没有细胞毒性，其是化学稳定的，惰性的，水溶性的和细胞不渗透的，不能透过完整的细胞膜。因此还可以同时与细胞耗氧率， 线粒体膜电位， ROS和细胞ATP 、LDH等检测的试剂结合使用，进行多参数检测。 用 P61进行细胞外酸化检测方法及其简单，不需要适用特殊的仪器设备，只需要荧光酶标仪之类的荧光读板设备即可。  P61采用可见光激发检测，相对于采用紫外光激发的检测试剂，细胞损伤更低，对细胞的毒害更小。结果更加准确客观。 细胞酸化检测试剂盒可以用于直接，实时分析细胞外酸化情况。本试剂盒可以用来测量各种全细胞（贴壁和悬浮细胞），各种3D培养物，组织，小生物，球体，支架和基质等。 以96孔细胞培养板计，本试剂盒小包装可以检测200个样本。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

1.探针-20℃密封避光保存；

2.避免反复冻融。可以根据实验进度安排小量分装保存；

3.探针P61需要配制成工作液后使用，注意看操作步骤以及注意事项；

4.检测缓冲液为无菌试剂，注意防止污染；

5.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

荧光酶标仪

适用样本

细胞

产品特点

1.广泛适用于各种体外模型；不再局限于单层细胞，还能测定悬浮细胞和特定的 3D 培养物；

2.简单的“混合-检测”方案允许使用多种其他分析试剂盒进行多参数分析；

3.无损可逆转，能够观察细胞外酸化的瞬态和长时间变化；

4.可适配多数荧光酶标仪以及标准 96 孔和 384 孔；

5.以高通量的形式方便地测量； 6.无需等待专用设备空闲所需的实验室时间，也无需大额资金专用设备投入

产品应用

细胞代谢研究

仪器准备

1.荧光酶标仪

须配备相应的波长过滤器和温度控制器。

须配备温度控制器。

2.离心机

3.pH计

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液或者HBSS 2.KOH / HCl

3.对照试剂（选配，非必须）：

Glucose Oxidase，2-Deoxyglucose，寡霉素A，抗霉素A，FCCP

耗材准备

1.黑色透明底荧光专用培养板

2.0.22 μm针头过滤器

3.离心管

4.吸头

5.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.以下操作以96孔细胞培养板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。

4.P61探针的信号变化直接取决于所测量细胞类型的细胞外酸化速率，建议尽可能使用每孔高的细胞密度作为起点，并根据需要减少细胞数量。

5.并非所有细胞类型都产生足够用于检测的酸化。

6.最hao使用荧光培养专用的透明底黑色培养板。实在没有的话可以采用透明板，注意细胞孔间隔开，减少检测时各孔之间的光互相干扰。

7.用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需37℃预热。

8.尽可能使用多通道移液器添加试剂。

9.建议每个测试样做3复孔。

10.试剂盒所配的检测缓冲液不能用其它缓冲液（如PBS/HBSS等）或培养基代替。说明书中所有提到使用检测缓冲液B的地方必须使用试剂盒所配的检测缓冲液。

11.待检测样本量较多时，可以采用简化的试剂配制步骤：将100 μL P61探针试剂（母液）添加到9900 μL预热的检测缓冲液中（100倍稀释），并使用多通道移液器，将100 μL稀释的含P61探针的检测缓冲液液添加到每个孔中（非空白对照孔，空白对照不含探针）。

12.ECAR/糖酵解测定通常允许同时实时测量多参数（或多重）组合，常与细胞耗氧量（OCR）同时测定，分析细胞的代谢表型以及测定糖酵解和线粒体呼吸两种途径之间的转换情况。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！