FITC-Phalloidin染色试剂盒(绿色荧光)
产品概述
细胞骨架染色试剂盒采用丝状肌动蛋白F-actin荧光染色法染色细胞骨架,可以用于各种动物、植物的细胞骨架染色。 本试剂盒采用荧光探针FITC标记的鬼笔环肽(Phalloidin)标记骨架蛋白F-actin。FITC为绿色荧光探针,也为客户提供橙红色和蓝色荧光的C12-Phalloidin和C13-Phalloidin标记试剂盒。可以满足您完整的F-Actin微丝蛋白荧光染色方案,为您提供极大的选择空间和便利。 细胞骨架(cytoskeleton)是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态,承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用。细胞骨架肌动蛋白是球形的、大约42kd的蛋白,在几乎所有的真核细胞都存在。这是一个非常保守的蛋白,在各物种差异不超过20%。肌动蛋白是两种细胞内丝状结构的构成单体:微丝(三种主要的细胞骨架成分之一),以及细肌丝(是肌肉细胞收缩复合物的一部分)。肌动蛋白参与很多重要的细胞功能,包括肌肉收缩,细胞移动,细胞分裂和胞质分裂、小泡和细胞器的运动、细胞信号,以及细胞连接和细胞形态的保持和建立。 显示细胞骨架的常用方法有两种:骨架蛋白染色法和免疫荧光染色法。骨架蛋白染色法具有简单易行的特点,但不能区分骨架蛋白的组成,有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,常用于骨架形态及完整性研究;免疫荧光染色法可特异显示骨架蛋白,是用一种微丝解聚抑制剂,它与肌动蛋白纤丝有强亲和作用,使肌动蛋白纤丝稳定,抑制解聚,且只与F-actin结合.因此,利用荧光标记可以清晰显示细胞中微丝的形态,利用荧光显微镜对荧光标记的细胞骨架进行观察,可以得到清晰的实验结果.具有更普遍的应用意义。 没有荧光观察条件,需要常规骨架蛋白染色试剂盒。 鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15?,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。 用荧光标记的鬼笔环肽染色可以清晰地显示细胞中微丝的分布。将鬼笔环肽注射到细胞中同样能阻止细胞运动,可见微丝的功能依赖于肌动蛋白的组装和去组装的动态平衡。鬼笔环肽这种性质使得它们成为一种探索F-Actin分布的的良好工具,可以通过用带有各种荧光探针的鬼笔环肽结合Actin丝状物在荧光显微镜下观察来实现。鬼笔环肽的荧光衍生物已经被证明在活体或固定细胞内定位Actin丝状物和在体外观察actin丝状物的实验中起重要作用。 FITC-Phalloidin染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。FITC-Phalloidin可以广泛用于固定、通透性细胞,但也可以进入活细胞中。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
有效期
6个月
检测方法
荧光显微镜/激光共聚焦
适用样本
动物细胞
产品应用
荧光显微镜/激光共聚焦
仪器准备
1.荧光显微镜/激光共聚焦
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.固定液4%多聚甲醛
3.透化液0.05-0.1% Triton X-100(溶于PBS)
4.100 nM DAPI溶液
5.盖玻片周围密封液(如透明指甲油)
6.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.载玻片和盖玻片
4.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.标本应新鲜,且未受其他化学物品污染。
3.应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。
4.动物细胞样本细胞通透剂处理的时间很关键,如果处理时间太短,会造成很深的背景颜色,干扰细胞骨架的观察;如果处理时间太长,会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂,造成细胞空洞。通透时间应控制在10-35分钟。需要根据预实验的染色结果确定最佳通透时间。一般预实验起始通透时间植物样本为10分钟,动物细胞样本5分钟。
5.染色液染色时间根据根据预实验结果可以进行调整,颜色过浅可延长染色时间,颜色过深可缩短染色时间。
6.洗片时动作要轻柔,避免将细胞从玻片上洗掉。
7.染色后用水充分洗涤,自然晾干即可,不能用常规的酒精梯度脱水方法。
8.不同样本的操作方法稍有差异,请根据具体样本操作。
9.下面以细胞爬片/涂片样本的染色为例,滴加相应的试剂到玻片上,加样量以覆盖样本即可。如果是植物切片等,也可以在离心管、试管等里面进行洗涤、通透、染色等操作,最后置载玻片上观察即可。
使用方法
1. 染色工作液配制:
将染料稀释液(10×)用纯水10倍稀释成1X染料稀释液备用。根据样本数量,用1X染料稀释液将FITC-Phalloidin荧光染料100-200倍稀释,配制成染色工作液。
2. 将制作好的细胞爬片/细胞涂片用37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗2次。
3. 细胞固定:滴加溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定5分钟,立即用PBS洗涤3次。
4. 室温条件下,透化细胞:滴加0.05-0.1% Triton X-100/PBS溶液透化处理样本,处理3-5分钟。
5. 室温条件下,用PBS洗细胞3次,自然晾干。
6. 室温条件下,染色:用适量细胞骨架染色液工作液,覆盖住玻片上的细胞,室温避光孵育40分钟-更长时间,最长可以过夜染色,一般40分钟-1小时即可。
7. 用PBS洗细胞3次,每次5分钟。自然晾干。
8. 使用适量浓度为100 nM 的DAPI溶液对细胞核进行复染,约30秒即可。
9. 用PBS洗细胞。
10. 用激光共聚焦显微镜观察。FITC-Phalloidin激发/发射波长495/513nm和DAPI激发/发射波长359-364/454-461nm。
结果:
细胞骨架纤维呈绿色。细胞核呈蓝色(如果DAPI复染)。
细胞核和细胞质表面分布许多排列不规则的纤维束,走向清晰。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
FITC-Phalloidin染色试剂盒(绿色荧光)信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于FITC-Phalloidin染色试剂盒(绿色荧光)报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应FITC-Phalloidin染色试剂盒(绿色荧光)外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供Influenza A H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) Hemagglutinin、SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike S1 (Q677H) Protein (His Tag)、SARS-CoV-2 Spike RBD (L452R, E484Q) Protein (His & AVI Tag)等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。