丙酮酸检测试剂盒

产品概述

丙酮酸(Pyruvic acid，PA)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。 丙酮酸检测可采用酶催化法，该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD+，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH的减少量，进而计算出丙酮酸含量。 丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)检测原理是在酸性条件下，丙酮酸与二硝基苯肼反应，生成丙酮酸丙酮酸-二硝基苯腙复合物，后者经氧化呈樱桃红色，通过酶标仪测定520nm处吸光度，据此通过与标准曲线对比可以计算出PA水平。 本试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血浆、血清等各种样品中内源性的丙酮酸含量的检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

酶标仪

适用样本

血清血浆、尿液、细胞、组织等，

产品应用

酶标仪

仪器准备

1.酶标仪

2.恒温箱

3.混匀器

4.移液器

5.冰盒

试剂准备

1.纯水

耗材准备

1.96孔板

2.吸头

使用注意事项

1.抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。

2.如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定，检测样品量会相应减少；

使用方法

样品准备：

1. 血浆、血清、尿液及其他体液样品：

血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

2. 细胞或组织样品：

取0.5g组织样品，加入组织匀浆液，仔细研磨，转移至新的离心管中，清洗研磨器一并倒入离心管中，补组织匀浆液至9ml，充分混匀，4000g离心10min，取上清，-20℃冻存，用于丙酮酸的检测。

3. 高浓度样品：

如果样品中含有较高浓度的丙酮酸，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

4. 植物样本：

称取100mg植物样本置于研钵内，加入适量组织匀浆液仔细研磨，用匀浆液定容至1ml，振摇提取，静置30min，取上清液4000g离心10min，取上清液备用。

配制标准品工作液：

如果检测血清、血浆、尿液等样品，取丙酮酸标准(6mg/ml)，按取丙酮酸标准(6mg/ml)：蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml；

如果检测组织样品，取丙酮酸标准(6mg/ml)，按丙酮酸标准(6mg/ml)：组织匀浆液B=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。4℃避光保存24h有效。

加样：

按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的丙酮酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品检测最hao能设置平行管。

丙酮酸检测：

充分混匀，其中空白呈淡黄色，标准孔依次呈不同程度的棕红色；用酶标仪，空白孔调零，比色杯光径1.0cm，测定标准孔、样品孔的520nm吸光度（即A标准，A样品）

计算：

以各丙酮酸标准浓度为横坐标，以各丙酮酸标准A标准为纵坐标，绘制丙酮酸标准曲线。

血清、血浆、尿液等的丙酮酸含量直接根据标准曲线求得。

组织丙酮酸（mg/g）=A x N/(M x 100)

式中：A为从标准曲线上查的丙酮酸浓度（ug/ml）

N为稀释倍数

M为样品的质量（g）

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！