组织活性氧(ROS)检测试剂盒

产品概述

组织活性氧检测试剂盒（红色荧光O13）是一种利用新型荧光探针O13进行组织活性氧检测的试剂盒。本试剂盒中的O13 ROS探针为红色荧光的活性氧探针，具有516 nm / 606 nm的最da激发/发射波长。 O13 ROS探针在组织中活性氧存在的条件下，被氧化生成红色荧光物质，红色荧光强度与组织内活性氧水平成正比，检测O13产物的荧光强度就可以知道组织内活性氧的水平。 在激发波长510 nm，发射波长610 nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪等仪器检测O13产物荧光强度，从而测定组织内活性氧水平。 一般最hao使用新鲜组织样本检测活性氧，反映的是组织当时的活性氧状态。冻存的组织样本的ROS在长期冻存过程中会损失掉，有条件的话就使用新鲜样本，不建议使用冻存的组织样本。已经冻存的组织样本中残余的ROS也可以用本试剂盒检测。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基（O2•-）（图1A）。超氧阴离子遇水生成H2O2（图1B），同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的作用下生成（图1C），生成的过氧化氢在髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的催化下与Cl-反应可生成ClO-（图1D），在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•（图1E），超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-（图1F）。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 O系列活性氧探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，还可以提供绿色、蓝色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

荧光酶标仪或荧光分光光度计

适用样本

新鲜组织

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.荧光分光光度计或荧光酶标仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.荧光检测专用黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.探针染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。

使用方法

试剂准备：

根据样本数量，用纯水将O13探针10倍稀释。充分混匀，备用。

样本处理：

1、 刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。

2、 准确称取50 mg或100 mg组织样本，加入500 μl-1 ml匀浆缓冲液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

3、 在100×g，4℃离心5分钟，取上清备用。

样本检测：

1、 在96孔板中加入190微升匀浆上清液、10微升O13探针，用移液器吹打，使之充分混匀。

2、 在37℃避光孵育20-30分钟。

3、 置于酶标仪中，激发波长为488-535 nm、发射波长606 nm检测荧光强度。

蛋白定量：

1、 另取50微升上清匀浆液，用PBS大约稀释30倍。

2、 取100微升进行蛋白定量。

结果处理：

以荧光强度（RFU）/蛋白浓度（毫克蛋白）表示组织活性氧强度。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！