AO/EB双染试剂盒
产品概述
AO/EB双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态,是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种具有细胞膜通透性的荧光染料,该染料能透过活细胞膜,使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,AO与dsDNA结合时发出绿色荧光,而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时,它与荧光素在光谱上非常相似,激发最大值为502nm,发射最大值为525nm(绿色)。当它与RNA结合时,激发最大值移至460nm(蓝色),发射最大值移至650nm(红色)。 在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例,其他方法请参阅相关资料。
4.AO将DNA染成绿色,RNA染成红色,红色荧光在激发光下不久就会消失,等AO的红色荧光消失之后再拍照,否则会干扰EB的红色坏死细胞。
使用方法
1. 染色缓冲液的配制:根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100 μL试剂C加900 μl无菌去离子水稀释,混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞,细胞数量在10X105个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500 μl染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5μl AO染色液A。
6. 加入5 μl EB染色液B。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
8. 用PBS洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。AO-DNA复合物的最da激发波长为488nm,最da发射波长为515nm,EB-DNA复合物的最da激发和最da发射波长分别为518nm和605nm。
结果分析 :
正常活细胞的核染色质着绿色,形态结构正常;早期凋亡细胞的膜结构完整,核染色质着绿色,但核已开始固缩或呈串珠状;晚期凋亡细胞,核染色质发橙红色荧光,呈固缩状或串珠状,有时核碎裂散布于胞浆中;有时还可见到细胞核结构正常,但细胞着红色,为非凋亡的死亡细胞。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
AO/EB双染试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于AO/EB双染试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应AO/EB双染试剂盒外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供小鼠水通道蛋白5(AQP5)检测试剂盒;AQP5试剂盒、大鼠泛醌细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅱ(UQCRC2) ELISA检测试剂盒、大鼠醌NADH脱氢酶1(NQO1)检测试剂盒等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。