使用 FRAP 预筛选膜蛋白结晶条件

如何利用光漂白后的荧光恢复 (FRAP) 来节省用户时间？

FRAP 可用于确定某一特定的结晶点样是否具有结晶的可能性。科学家可以在耗时 30 分钟的 FRAP 试验中检查蛋白质构建体、配体、LCP 宿主脂质和沉淀剂。那些表现出蛋白质迁移的结晶条件有可能随后成功结晶。

LCP 中的蛋白质扩散 = 结晶的可能性

用 FRAP 预筛选配体

我们通过高通量 LCP-FRAP 实验评估结晶试验所确定的最佳配体。嘌呤能 P2Y12 与 AZD1283 的受体复合物在 LCP 中的扩散比 ADP 复合物高得多。在对两种复合物进行广泛筛选后，只有 P2Y12-AZD1283 复合物产生了晶体，表明迁移率和结晶产生之间存在很强的相关性。 

使用 HT LCP-FRAP 优化血清素受体亚型

我们进行高通量 LCP-FRAP 实验以确定结晶试验的最佳血清素 (5-HT) 受体亚型。不同受体亚型的四个代表性结果显示在颜色编码矩阵中，其中蓝色突出显示迁移率几乎为零的结晶板孔，绿色表示中等迁移率，红色表示高迁移率和最高结晶概率。5-HT1Breceptor 是唯一一种在 LCP 中显示迁移并产生用于结构测定的晶体的蛋白质。

完全恢复FRAP分析

完全恢复 FRAP 分析能够做到探测单孔结晶条件以确定迁移率。FORMULATRIX® 的自动 FRAP 成像仪在 20-30 分钟内以规定的时间间隔测量同一点的荧光恢复。完全恢复曲线提供有关脂质迁移和样品异质性的信息，有助于排除假阳性结晶。

具体如何操作

在 30 分钟内筛选 96 个结晶条件

FRAP 自动分析 96 孔 LCP 板以确定每一滴液滴的迁移率。每个结晶板孔都通过聚焦的激光点进行光漂白，并测量固定时间点后的荧光恢复。在液滴中可迁移的蛋白质百分比表明是否可能产生结晶。

FRAP 成像仪发射光漂白激光脉冲，该脉冲从二向色镜反射，通过激发滤光片，从第二个二向色镜反射，漂白样品。

LED 通过聚光镜照射光线，光线沿着与激光相同的路径，照射样品。

然后处理荧光图像。