NT8® 作为一款用于高通量结晶筛选的先进液体处理器在分液体积和湿度方面的性能表现

2004 年 Structural Genomics Consortium 的成立显着增加了每年存入蛋白质数据库 (PDB) 的结构数量，原因有两个：大量研究人员专注于解决和存入结构以及创建自动化结晶筛选的空间。如果没有自动成像仪，这是无法实现的，因为结晶实验的常规检查非常耗时。然而，能够分配亚微升体积的专用液体处理器对于加速结晶筛选而言，之前是并且现在仍然是一个硬性需求。

这些液体处理器通常被称为自动点晶系统，能让研究人员更快地设置实验，但更重要的是，由于仪器可靠的低体积点样性能，可以使用相同数量的样品设置更多筛选实验。不幸的是，低体积点样的结晶实验对蒸发非常敏感，这可以通过仪器速度（如果仪器没有其他缺点，那么速度就无法提高）或通过添加湿度控制来抵消。

主动湿度控制测试

我们之前曾说明过湿度控制在结晶筛选中发挥的关键作用（Friedlander 等人，Acta Cryst. (2017). A73, a208）。NT8 将湿度控制提升到一个新的水平，三个独立控制的传感器以线性等比方式响应 NT8 室内的湿度水平。从图表中可以看出，NT8 使用标准设置可以在一分钟内达到设定值，并以最小的波动保持湿度水平。因此，它消除了与大气条件、一年中的不同时间、实验室地理位置等相关的重现性问题。

点晶的精度

在这里，我们展示了 NT8 的液体处理性能，突显了典型使用场景中出现相对不精确性的次数仅为个位数。NT8 在结晶筛选中使用的典型体积（100 nL 及以上）中表现出低于 3% 的Cv、OA 的固体湿式分配性能。同时，它能够湿式分配小得多的体积（10-50 nL），可用于fragment cocktail/添加剂筛选以及微种晶实验。

关于 NT8® 自动点晶系统

NT8 是加入点晶仪器的行列最新的自动化解决方案之一。该系统采用模块化头部结构，能够组合搭配低容量 (LV) (=<1.5 uL)、高容量 (HV) (20-200 uL) 和脂质立方相 (LCP)（低至 0.03 uL ) 子组件。低容量点样枪头使用可自动清洗和重复使用的专有点样头，以减少研究人员的消耗品成本和环境影响。相比之下，其他两个点样枪头使用市售耗材。NT8 还包括一个内置的 LCP 混合器和最先进的湿度控制系统，线性等比控制防止液体蒸发。

NT8® - 自动点晶系统

无需担心加湿导致水用光

NT8 在使用少量水的同时保持 85% 的相对湿度。系统还带有上一个 5 加仑的水箱，这意味着用户在点样过程中不会用完加湿量或需要经常补充去离子水。

材料和方法

NT8 主动加湿控制测试

将NT8 放置在一个封闭的房间中一夜， 房间相对湿度平衡在45% 。然后使用两个 Sensiron® SHT31 Smart Gadget 以 1 秒的间隔记录湿度以此收集数据。其中一个 SHT31 设备被放置在 NT8 外面的工作台上，另一个放置在Plate Station 1 中。最后关上 NT8 罩子并在Plate Station 2 上执行简单的结晶板点样，以此模拟典型的操作环境。

NT8 小容量点样枪头精度测试

精度 (CV) 测试按照“TEMPEST® 液体处理器安装和操作认证”文件中的描述进行，该文件如若需要，可从 FORMULATRIX® 获取。我们进行了三项必要的修改：1) 制作 3110 Au 工作染料以覆盖 20nL 至 200 nL 的范围；2) 制作 6220 Au 工作染料，用于 10 nL 液体点样；3) 使用 Brand® 781602 板替代 Corning® 3631/3632 板

简而言之，首先，使用 MANTIS® 连续流量向测试板填充 100 ul 稀释剂。接下来，使用 NT8 将不同体积的荧光素从蛋白质样品区转移到测试板。然后将板转移回 Mantis 以进行第二次 100 ul 稀释剂添加。混合并向下旋转测试板后，使用 BMG Spectrostar Nano® 读板器测量光密度。单个 96 孔板可用于任何给定体积。总体 Cv (Cv, OA) 和每通道 CV 的 RMS (RMS(Cv,1-8) 根据 ISO IWA 15:2015(E) 计算

总结

根据所提供的数据，我们得出结论，NT8 是结晶筛选的首选工具，它能够通过消除环境湿度以及液滴设定体积性能来完成高度可重复的结晶筛选实验。NT8 的极低容量性能虽然在精度上会欠缺一些，但其仍将有利于微种晶、添加剂和cocktail筛选实验。