SDS细胞裂解液（带抑制剂）

SDS细胞裂解液（带抑制剂）

订购信息

产品描述

SDS细胞裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液，通过阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解，特别适用于膜蛋白或者细胞骨架蛋白等难溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。本产品具有有强烈的蛋白变性作用，不能用于非变性蛋白方面的研究。本产品裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、染色质免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。

产品组分

保存方法

裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。

使用方法

1. 对于培养细胞样品

(1) 融解SDS细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10 min。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。具体SDS细胞裂解液的使用量参照表1.
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 对于组织样品：
(1) 把组织剪切成细小的碎片。
(2) 融解SDS细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
(3) 按照每20毫克组织加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体SDS细胞裂解液的用量参照表1。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

注意事项

1. 用SDS细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。

2. 通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200 μL裂解液。

3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

表1 :SDS细胞裂解液的使用量

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！