Recombinant Enterokinase重组肠激酶
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产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Recombinant Enterokinase重组肠激酶 | ZY-63L017 | 10 x 5000 U | 45000 |
产品描述
肠激酶(Enterokinase)是一种蛋白酶,高度专一性识别天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,DDDDK)序列,切割赖氨酸羧基端肽键,去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,释放出目的蛋白。重组肠激酶(Recombinant Enterokinase,rEK)是高纯度纯化的牛肠激酶轻链亚基,它与天然提取的肠激酶具有同样特异的切割酶活性,且切割速率更快。
重组肠激酶,采用重组酵母分泌表达,纯度高、活性高,可以在较宽pH范围(pH4.5~9.5)和温度范围(4~45℃)有效切割,不含其它蛋白酶,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。
重组肠激酶(rEK)被广泛地应用于基因工程产品的开发,例如,作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性切割,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。产品特性见表1。
保存方法
-20℃保存,冰袋运输。质保期12个月
使用方法(参考举例)
1. 反应体系构建,以1000 μL为例,反应体系如下:
融合蛋白 | 0.5~1 mg(蛋白浓度:0.1~1 mg·mL-1 ) |
Recombinant Enterokinase重组肠激酶 | 0.5~2.5 uL(相当于2~10U) |
10 x rEK反应缓冲液 | 100 μL |
超纯水 | 根据需要补充体积到1000 μL |
【注】:10× rEK反应缓冲液配方:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0(22℃),10 mM CaCl2,1% Tween-20。
2. 25 ℃过夜酶切,可用SDS-PAGE检测酶切效果。
3.(可选)本品具有高活力的重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑去除。后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(eg.DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:平衡缓冲液:25 mM Tris-HCl,pH8.0;洗脱缓冲液:25 mM Tris-HCl ,pH8.0,含100 mM NaCl。
注意事项
1. 样品溶液含有在>2 mM 尿素,或>250 mM NaCl,或>20 mM β-ME,或>0.1% SDS,或>50 mM咪唑条件下,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到1×反应缓冲液中,然后再进行酶切实验。
2. 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,少量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
来源(Source) | 重组酵母 |
分子量(Molecular Weight) | 理论值25.850 kDa |
外观(Appearance) | 透明液体 |
酶浓度(Enzyme Concentration) | 4 U/uL |
活性定义(Activity Definition) | 在37℃,16小时内将0.5 mg的Thioredoxin-NP-27 95%降解为NP-27所需要的酶量定义为1个活性单位(1U) 。 |
内毒素检测(Endotoxin) | 用LAL法测定内毒素含量小于1 EU·μg-1 |
质量保证(Quality assurance) | 经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。 |
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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