Rat--免疫组化试剂盒

Rat--免疫组化试剂盒

产品简介

  此免疫组化试剂盒采用 SABC 放大系统，DAB 显色。SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用 以显示组织和细胞中抗原分布，链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量 47000，同亲和素一 样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10)， 经改造后可以转变成中性蛋白质，链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附 很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低，SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，根据研究SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物，大量的酶将保证 SABC 具 有很高的敏感性，SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

使用方法:

石蜡切片热修复抗原染色程序:

1.   制备切片，常规脱蜡至水。

2.   滴加内源性过氧化物酶阻断剂室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

3.   热修复抗原:将切片浸入EDTA抗原修复液或枸橼酸盐缓冲液电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS洗涤1-2次。

4.  滴加正常兔血清封闭液室温20分钟。甩去多余液体 不洗。

5.  滴加适当稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）

6.  滴加biotin山羊抗大鼠IgG20-37℃ 20分钟。PBS洗2分钟×3次。

7.  滴加试剂SABC20-37℃ 20分钟。PBS洗5分钟×4次。

8. DAB显色:使用DAB显色剂。取1ml蒸馏水加试剂盒中DAB显色剂ABC试剂各1滴混匀后加至切片。室温显色 镜下控制反应时间，一般在1-15分钟之间蒸馏水洗涤。

9.   苏木素轻度复染。脱水透明封片。显微镜观察。

B. 石蜡切片酶消化程序:

   以下面的步骤代替A程序中的第4步:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。

C. 石蜡切片不消化/不修复程序:

对于不需要微波修复或消化的抗原省略A程序中的第4步即可。

D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序：

1.  载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。

2.  固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定60-90分钟。

3.  30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合室温浸泡30分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。

其余步骤和石蜡切片5-10步相同。

如果冰冻切片直接染色结果不理想时可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10步相

同。

注意事项：

1.    如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前用加有0.01—0.02% Twe-20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。

2.    热修复抗原首先推荐使用EDTA抗原修复。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！