Coomassie brilliant blue R250
产品简介
考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue)是两种相似三苯甲烷染料的总称,有G250和R250两种,结构上前者比后者多了2个甲基,命名上 “G”为Green 的缩写,因G250的蓝色染料泛浅绿色;命名上“R”为Red的缩写,因R250的蓝色染料呈微红色调;“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是:通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力,考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)更多用于电泳蛋白的染色,染色灵敏度比氨基黑高5倍,可达0.1μg蛋白。R250染色后需要褪色,才能进行蛋白条带的观察。
使用说明:
染色步骤(考马斯亮蓝G250 for SDS-PAGE 胶)
1) 电泳完毕后用足量超纯水清洗凝胶10-30s 以去除SDS。
2) 将凝胶于50%甲醇,10%醋酸,40%水溶液中固定,水平摇床上低速摇动30min;
3) 去除固定液,更换0.1%考马斯亮蓝G250染色液(0.1% G250 溶于25%甲醇,5%醋酸)完全覆盖住胶,染色30-60min。
4) 染色结束后超纯水清洗凝胶,2-3次,每次5min。
5) 于30%甲醇脱色直至蛋白条带清晰可见。
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