总蛋白抽提试剂盒

总蛋白抽提试剂盒

产品简介

1. 我们生产的总蛋白抽提试剂是一种传统的细胞组织快速裂解液。蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

2. 总蛋白裂解液的主要成分为SDS、NP-40 、sodium deoxycholate 及aprotinin等多种蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

3. 用总蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法:

对于培养细胞样品：

1. 取适当量的总蛋白裂解液混匀，在使用前数分钟内，按照 100:1 的比例加入磷酸酶抑制剂、蛋白

酶抑制剂和 PMSF 三联装。

2. 对于贴壁细胞，去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍，加入适量裂解液，用枪吹打

数下，使裂解液和细胞充分接触，轻轻的摇晃约 5-10 分钟，充分裂解后，10000-14000g 离心 10 分钟，

取上清，即可进行后续操作。

裂解液用量说明： 用于不同规格标准培养板裂解液容量

板规格/表面积 试剂容量

100mm 500-1000μι

60mm 250-500μι

6-well plate 200-400μιper well

24-well plate 100-200μιper well

96-well plate 50-100μιper well

3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍，加入适量裂解液，用枪

吹打把细胞吹散，用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞

沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解，充分裂解后，10000-14000g 离心 10 分钟，取上清，

即可进行后续操作。

对于组织样品：

1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成

几个较小的组织块放入组织匀浆器中。

2. 取适当量的总蛋白裂解液混匀，在使用前数分钟内，按照 100:1 的比例加入磷酸酶抑制剂、蛋白酶

抑制剂和 PMSF 三联装。

3. 按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可

以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。

4. 用匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3- 5 分钟，取上清，即可进行后续作。

注：总蛋白裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基

因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上

清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明

胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，

通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行，建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接

以液体状态置-80℃中保存，不要反复冻融。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！