Klenow片段

Klenow片段

Klenow Fragment

Klenow片段是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)。来源于大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。

Klenow片段保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。

特点：对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。

用途：双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。

分子量：约68kDa(单体)。

活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。

纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。

储存条件：-20℃

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