动物细胞核制备试剂盒（密度梯度法）

动物细胞核制备试剂盒（密度梯度法）
Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit

用高密度介质来分离动物软体组织（如肝脏、脾脏等）细胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年发明，其原理是细胞核的密度较大，在高速离心条件下可在高密度介质中沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核，得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来，它具有下列特点：
1. 基于密度梯度分离，可有效去除细胞质及其他细胞器，得到的细胞核纯净。 
2. 加入了可以改变分离介质渗透压的物质，减少了细胞核的脆性，增加了细胞核的完整性。
3. 精心调节了介质的pH，防止细胞核在分离过程中的聚集，还能保持细胞核的精细结构。
4. 快速，整个操作过程仅需1小时即可完成（对一个样品而言）。
5. 提供染色试剂，可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6. 处理温和，得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性，可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究；也可用于超大片段DNA的纯化。
7. 不但适用于动物和植物培养细胞，还能用于实体组织（能用Dounce或Potter匀浆器匀浆的组织均可）。
8. 一次微量提取足够处理0.1 g组织或5×107个培养细胞，本产品足够50次细胞核微量提取。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！