糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）

糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）

Staining Kit for Glycoprotein

本产品为在SDS-PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂，所需时间仅需不到两小时，而其他的染色方法需要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。

产品特点：
1．包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白。
2．简洁、易储存的试剂盒。
3．本产品足够10张mini-PAGE胶或20张8×8cm蛋白免疫印记硝酸纤维素膜染色。

产品组成：

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂：0.9%NaCl溶液或PBS缓冲液、BCA工作液。

使用方法：

实验前准备
1．配制3%乙酸溶液：将30mL冰醋酸与970mL超纯水混匀，室温保存备用。
2．配制50%甲醇溶液：将250mL甲醇与250mL超纯水混匀，室温保存备用。
3．配制氧化试剂：向氧化试剂干粉中加入250mL的3%乙酸溶液，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。
4．配制还原试剂：向还原试剂干粉中加入250mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，室温保存备用。
5．配制阳性对照(辣根过氧化物酶)：向1mg固体中加入0.5mL超纯水，使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的阳性对照。将配制好的阳性对照分装后-20℃保存。
6．配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)：向1mg固体中加入0.5mL超纯水，使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的阴性对照。将配制好的阴性对照分装后-20℃保存。
7．样品稀释：用SDS-PAGE上样缓冲液将样品浓度稀释为1mg/mL，对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的样品。

凝胶染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1．取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，加入到100mL 50%甲醇溶液中，完全浸泡30分钟后，倒出甲醇溶液。
2．用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡10分钟。
?注：如有需要，此步的胶块可在超纯水中4℃过夜处理。
3．将胶块转移到25mL氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
4．用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块3次，每次轻轻振荡5分钟。
5．将胶块转移到25mL糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。
?注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。
6．将胶块转移到25mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
7．用3%乙酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%乙酸溶液中。

硝化纤维素膜染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1．用20mL 3%乙酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10分钟。
2．将膜转移到10mL的氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
3．用10mL 3%乙酸溶液洗涤膜3次，每次轻轻振荡5分钟。
4．将膜转移到10mL的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。(注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。)
5．将膜转移到10mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
6．用3%乙酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%乙酸溶液中。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！