DNA磷酸化试剂盒

DNA磷酸化试剂盒

DNA Phosphorylation Kit

人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5′端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！