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柱式拭子DNAout(改名液体样品DNAout)
Swab DNA columnDNAout
本试剂盒是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀,然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。
产品特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组DNA 完整性,其中最长可以到达长度一般在20-50kb。
3. DNA 纯净,OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4. 操作简单,整个过程约30分钟。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 50ml |
溶液B | 50ml |
溶液C | 100ml |
RNase A(10mg/mL) | 150μl |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
DNA洗脱液2.0 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 匀浆方法一:称取0.1-0.3g软体动物组织,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA 会吸附在表面,影响得率。在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。进入第三步。
2. 匀浆方法二:将0.1-0.3g软体动物组织剪成小块,转移到10-15mL塑料管中(培养细菌那种离心管即可),加入1mL 65℃预热的溶液A,用Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆1分钟左右。
3. 65℃保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。
4.转移到新的1.5mL离心管中,12000~15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后,室温放置5-10分钟。
13. 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL DNA 洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为软体动物DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA(第二次洗脱的DNA一般有第一次的30%左右)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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