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一步法大提质粒DNA提取试剂盒(一步法大提质粒DNAout)
One-step plasmid DNA large-scale extraction kit
本试剂盒是在我司一步法质粒DNA提取试剂盒2.0(BTN70903)基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。
试剂盒特点:
1.快速,整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟,比传统的碱变性方法快捷。
2.超螺旋比例高,独创的非碱法一步式细菌裂解技术,避免了强碱对DNA的损害,得到的质粒DNA 切口更少。
3. DNA 纯度高,几乎没有基因组DNA和RNA污染,OD260/280一般在1.7-1.9 之间。
4. DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 最大吸附量为600μg DNA,具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单,重复性和稳定性好。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 100ml |
大离心吸附柱 | 5套 |
通用预洗液 | 100ml |
通用洗柱液 | 100ml |
DNA洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 用50mL离心管分数次收集10-100mL 新鲜的菌液,一般可以5000rpm离心10分钟,去除上清即得细菌沉淀。
2. 往细菌沉淀中加入20mL溶液A,充分振荡悬浮或吹打混匀。
?注意:充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中,放入到配套的收集管中。
4. 6000rpm离心5-10分钟,弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA,而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液,可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5. 将10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
6. 重复上步一次。
7. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
8. 重复上步一次。
9.室温6000rpm 空甩5分钟,弃穿透液。注意:此步很重要,不能跳过。
10. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中,加1mL 通用洗脱液(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳),室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,收集液即是质粒DNA溶液。
11. 重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
12. 合并所得质粒DNA,立即使用或-20℃储存。
注意事项:
1.细菌培养时间一般为12-16小时,但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2.菌体过多会造成裂解液粘稠透,需要充分吹打,否则容易堵塞离心柱。
3.通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次,否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
4.质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
5.从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常,它们就是还未来得及分开的相套的质粒,易被误判为基因组DNA。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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