大鼠主动脉弓平滑肌细胞

大鼠主动脉弓平滑肌细胞详述

血管疾病发生和发展的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞（smooth muscle cells, SMCs）转变成为了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表达钙离子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成血管壁炎症反应，并进一步造成血管疾病的原因 。因此，对血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的血管疾病的靶向治疗方法。

大鼠主动脉弓平滑肌细胞特性

1） 组织来源于实验动物的正常主动脉组织。
2） 细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。
3） 经鉴定细胞纯度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5） 细胞生长方式：长梭形，不规则细胞，贴壁培养。

大鼠主动脉弓平滑肌细胞的运输和保存
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
大鼠主动脉弓平滑肌细胞产品使用
1) 本产品仅能用于科研
2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3) 本产品未通过用于活体诊断的审核

原代细胞培养中的六个错误做法：

原代细胞培养与细胞株不同，两者在培养过程中的操作方法也不一样。这里对原代细胞操作过程中容易出现的6

个错误及对应方法做一个说明。

1.长时间水浴解冻：

因为原代细胞非常容易受到解冻过程的影响，所以在37℃水浴锅中解冻时，要在水中摆动溶解。在细胞半溶后

（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超净台中，用1ml的枪，抽出事先准备好的完全培养基打入冻存

管中，然后抽到培养瓶中，反复进行，直至完全溶解。

2.把冻存管的细胞溶解后迅速离心：

 如果原代细胞溶解后马上离心，细胞所受的打击可能比DMSO的毒性还要大，不建议采用这个方法。用带有血清

的完全培养基溶解后铺瓶，第二天换液去除DMSO。

 3.让原代细胞长满（百分百）瓶（皿、板）：

  原代细胞长满后，细胞会出现老化。因为原代细胞不是百分百的细胞团，把混入的细胞控制在最小限度非常重

要。建议细胞长到90-95%进行传代

 4.传代时用大量的胰蛋白酶处理：

 原代细胞传代时，要用低浓度的胰蛋白酶消化，在显微镜下看到细胞开始变圆、脱落后迅速终止胰蛋白酶。建议

采用含10%血清的完全培养基终止或大豆由来的蛋白酶终止剂终止。

5.细胞培养后再冻存：

原代细胞再冻存后，细胞会老化、也可能引起机能变化，所以不建议再冻存。细胞再冻存也是细胞死伤的主要原

因。

6.原代细胞无限增殖：

原代细胞和细胞系不同，增殖能力是有限的。为了防止遗传上的变化，尽快开始做实验。另外，为了防止混入杂

细胞比例的增加，要经常观察细胞形态。