Western Blot实验中各转膜方法优缺点分析

Western Blot实验中各转膜方法优缺点分析

WB，蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

转膜（Transmembran）是将电泳后分离的蛋白质转移到固相载体（PVDF膜或NC膜）上的过程。通常有两种方法，毛细管印迹法和电泳印迹法，常用的电泳印迹法有湿转和半干转两种。两者基本原理相同，只是在用于固定胶/膜叠层和施加电场的装置不同。近些年，有些公司也推出了快速转膜的仪器，有的也得到了一部分用户的认可。这些转膜方法各有什么优缺点，我们将从多方面分析一下。

湿转

湿转是将胶/膜叠层装置浸入缓冲液中，在胶/膜叠层的两侧加电场，电流会从胶/膜叠层中穿过，使带电的蛋白在电流的作用下转移到膜上。电流除了从胶/膜叠层穿过，还可以从缓冲液的其他区域流过，加上胶/膜叠层的电阻也比其他区域的电阻大，大部分电流优先从没有胶/膜叠层区域的缓冲液中流过，也就是说作用到胶/膜叠层的有效电流是很少的。再者，随着转膜时间的增加，缓冲液中的有效离子的浓度也会不断地降低，表现为恒流转膜时，电压会不断上升，恒压转膜时，电流会不断降低。这就导致了湿转的时间很长，一般在1-2个小时，但是慢也导致了结果的均匀和稳定。

半干转

半干转是用浸满转膜缓冲液的滤纸夹住胶/膜叠层装置，组成三明治结构，在这个三明治结构的两侧加上电极，形成电场。这时电场只作用在三明治结构上，因为三明治结构周围没有缓冲液，所以电流不会侧漏。几乎所有的电流都经过了胶/膜叠层，所以半干转的效率很高，速度很快，一般在半小时以内。但是，由于半干转用到的缓冲液很少，只有两侧滤纸浸入的一些缓冲液，这就导致了半干转缓冲液中有效离子的浓度衰减很快，可能几分钟后，它的有效离子已经消耗殆尽，这时大分子量的蛋白还没有完全转到膜上，如果再增加转膜时间也是无济于事的。半干转还有个问题就是产热，由于它没有足够的缓冲液来降温，导致它的热量很难散掉。

快速转膜

近些年出现的快速转膜基本上都是在转膜试剂上做一些优化，使转膜时的电流增大；加大电压或电流等策略来实现快速转膜的目的，有的电流能达到1-2A。这种方法没有从根本上解决上面湿转和半干转，电流侧漏、有效离子浓度衰减，产热等问题，大电流还增加了烧膜的风险。

中科通仪M-Blot快速转膜仪

中科通仪自主研发生产的专利产品M-Blot快速转膜仪是湿转和半干转的结合，从根本上解决了传统湿转和半干转的一些问题。

M-Blot快速转膜仪是在半干转装置的基础上增加持续补充转膜缓冲液的功能，使三明治结构处于一个湿转的环境中，这时它既有湿转的均匀和稳定，又有半干转的效率。它有以下特点。

1.新 新型湿转，转膜过程中缓冲液每一秒都是新的，持续补充有效离子。

2.快 转膜过程只需10-15分钟。

3.省 节省试剂，单次只需100ml。

4.通 试剂开放，专用试剂效果更佳。

5.稳 恒压转膜，电流也稳定，高重现性。

6.冰 新缓冲液的补充同时也带来了更低的温度。

7.染 不止有转膜，它还可以染色。

8.简 全触屏操作，简单方便。

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