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人乳腺癌紫杉醇耐药株实验步骤
2020/05/08 15:35
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方案摘要：
产品配置单：
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方案详情：
人乳腺癌紫杉醇耐药株实验步骤:
1组织固定：烘箱温度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；
2脱蜡：二甲苯浸泡三次，每次10分钟；
3水化：依次经过无水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇浸泡，每次5min；
4洗涤：自来水冲洗1次，PBS浸泡3min；
5抗原修复：放入稀释100倍的柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0) 中，高压锅煮沸10min，常温冷却30min；
6洗涤：纯水浸泡2次，PBS浸泡1次，每次3min；
7灭活酶：室温下3%过氧化氢-甲醇暗处处理切片15min；
8洗涤：纯水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；
9封闭：加入适当体积的super block（KT1002a Reagent A），37℃温箱孵育5min；
10洗涤：纯水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；
11一抗：加入反应体积为0.15ml，适合浓度的一抗, 37℃ 湿盒孵育60min。
12洗涤：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；
13加入适当体积生物素标记的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃湿盒孵育10min；
14洗涤：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；
15加入适当体积酶标亲和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃湿盒孵育10min；
16洗涤：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；
17显色：滴加适量DAB显色液(KT1003a)至切片上，室温显色1~5min，自来水冲洗；
18复染：苏木素染色5min，蒸馏水冲洗5min；
19分化： 0.5%盐酸乙醇混合液中分化，自来水冲洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返蓝，自来水冲洗2次。
20脱水：经过70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，无水乙醇浸泡，每次5min；
21透明：二甲苯浸泡2次，每次10-15min；
22封片：晾干后加中性树胶，盖玻片封片；
23结果：显微镜观察，记录结果。
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