细胞培养步骤:
一.狗肾恶性组织细胞增生症细胞;DH82价格培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
细胞名称 狗肾恶性组织细胞增生症细胞;DH82
形态特性 巨噬细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 DH82细胞具有类似巨噬细胞形态,并能吞噬乳胶颗粒。 细胞具有Fc gamma受体阳性,Fc mu和C3b受体阴性。 细胞不生成IL-1。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 优质胎牛血清,10
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 ?益?闃招孩?ú濄摯?
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
狗肾恶性组织细胞增生症细胞;DH82价格 | 贴壁生长 | CS-X8274 |
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是公司正在热销的产品:
BRCA1 英文名称: 癌易感基因1抗体 0.1ml
Anti-MAP1A 微管相关蛋白1A抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
CA ELISA Kit 大鼠儿茶酚胺Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-V.cholera Ogawa 01群稻叶型霍乱弧菌抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GAD67 谷氨酸脱羧酶-67抗体 规格 0.1ml
5-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶 96T
NESG1 英文名称: 鼻咽上皮细胞特异性蛋白1抗体 0.1ml
狗肾恶性组织细胞增生症细胞;DH82价格Rhesus antibody Rh Phospho-NMDAR2A/NR2A (Tyr1246) 磷酸化谷氨酸受体2A抗体 规格 0.1ml
CRP (C-reactive protin) C-反应蛋白(抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Anti-SNAP-25 /FITC 荧光素标记突触相关蛋白25抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
ADORA3/A3AR(adenosine receptor A3) 腺苷受体A3抗原Multi-class antibodies规格: 0.5mg
抗水稻白叶枯病菌Os05g0477200蛋白抗体 anti-Os05g/0477200 protein 1ml
pig cholerae salmonella 英文名称: 猪霍乱沙门氏菌抗体 0.2ml
phospho-EGFR (Tyr1092) 英文名称: 磷酸化表皮生长因子受体抗体 0.1ml
公司产品采用干冰运输,经过逐步的降温,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暂时停止其生命活动,保存其活性,使您的实验更生动,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等国际品牌.