细胞培养步骤:
一.人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16规格培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
细胞名称 人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16规格 | 贴壁生长 | CS-X6964 |
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是公司正在热销的产品:
人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试剂盒英文名称:Human antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin,ADH/VP/AVP ELISA Kit进口/分装
人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)ELISA试剂盒英文名称:Human anti-streptolysin O,ASO ELISA Kit进口/原装
人抗淋巴细胞毒抗体(ALA/LCA)ELISA试剂盒 英文名称:Human anti-lymphocytotoxic antibody,ALA/LCA ELISA Kit特价促销
人抗淋巴细胞球蛋白(ALG)ELISA试剂盒 英文名称:Human anti-lymphocyte globulin,ALG ELISA Kit特价供应
NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C) 谷氨酸受体2C(多肽)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Anti-ARC ARC抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATF2(Thr69/71) 磷酸化活化复制因子2抗体 规格 0.1ml
人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16规格Cyclin E2 英文名称: 周期素E2抗体 0.2ml
Anti-GLP-1/KG-31 GLP-1单克隆抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
AGAA(Human anti-golgi apparatus antibody) ELISA Kit 人抗高尔基体抗体Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-IRAK 白介素-1受体相关激酶1/2抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ligamentum Nuchae Elastin 项韧带弹性蛋白抗体 规格 0.2ml
UU-Ab(Human Ureaplasma urealyticum antibody) ELISA Kit 人解脲脲原体抗体 96T
Quiescin Q6 英文名称: 巯基氧化酶1抗体 0.2ml
公司产品采用干冰运输,经过逐步的降温,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暂时停止其生命活动,保存其活性,使您的实验更生动,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等国际品牌.