人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)；KP-N-NS说明书

细胞培养步骤：

一．人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)；KP-N-NS说明书培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

细胞名称 人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)；KP-N-NS

形态特性  其他

生长特性 贴壁生长

特征特性  源自脑转移灶的肾上腺神经母细胞瘤。

培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%

传代方法  消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。

传代情况 PN5

冻存条件  完全培养基+8%DMSO

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

以下是公司正在热销的产品：

人白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒英文名称：Human leukemia inhibitory factor receptor，LIFR ELISA Kit 特价供应

人百日咳毒素(PT)ELISA试剂盒英文名称：Human Pertussiu Toxin，PT ELISA Kit特价促销

E-cadherin E-钙粘附分子抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-APC/Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤样息肉抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-BACH1/BRIP1(Ser990) 磷酸化癌易感基因相互作用蛋白1抗体 规格 0.1ml

山羊抗人 IgG(H+L)/FITC 0.1ml 绿色荧光，Jackson公司分装

VNN1 英文名称： 血管非炎症分子1抗体 0.1ml
人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)；KP-N-NS说明书Rhesus antibody Rh RYBP/APAP1/CD337 凋亡相关蛋白1抗体 规格 0.2ml

Anti-MRP1/FITC 荧光素标记多药耐药相关蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

ARA(Human anti-gastric parietal cell antibody) ELISA Kit 人抗网硬蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-IKK alpha (Tyr463) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MAGEB1 黑色素瘤相关抗原B1抗体 规格 0.2ml

EL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit 人内皮脂肪酶 96T

RHOG 英文名称： RHOG抗体 0.2ml

公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等国际品牌.