公司产品采用干冰运输,经过逐步的降温,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暂时停止其生命活动,保存其活性,使您的实验更生动,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等国际品牌.
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
SV40T转化的人胚肾细胞;293T说明书 | 贴壁生长 | CS-X6433 |
细胞名称 SV40T转化的人胚肾细胞;293T
形态特性 上皮细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 293细胞株插入SV40 T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清,10%
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
细胞培养步骤:
一.SV40T转化的人胚肾细胞;293T说明书培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是公司正在热销的产品:
Rhesus antibody Rh phospho-Eg5(Tyr92) 磷酸化驱动蛋白样蛋白1抗体 规格 0.1ml
胎血清(特优级) 500ml Hyclone
ZNF263 英文名称: 锌指蛋白263抗体 0.2ml
DYRK2 英文名称: 双特异性酪酸磷酸化调节激酶DYRK2抗体 0.2ml
β-酪蛋白(抗体)兔抗山羊、绵羊 Anti-Beta-casein 0.1ml
EID2 英文名称: EID2蛋白抗体 0.1ml
辣根过氧化物酶标记β-肌动蛋白 Anti-β-Actin/HRP 0.1ml
SV40T转化的人胚肾细胞;293T说明书C22orf25 英文名称: 22号染色体开放阅读框25抗体 0.2ml
Anti-FAS/Apo-1/CD95 载脂蛋白A1抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
E-selectin 大鼠可溶性E-选择素Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Phospho-EEF2k (Ser366) 磷酸化真核延伸因子激酶2抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MYOM2 肌间蛋白2抗体 规格 0.2ml
SIgA(Human secretory immunoglobulin A) ELISA Kit 人分泌型免疫球蛋白A(人唾液) 96T
SLC4A4 英文名称: 碳酸氢钠协同转运蛋白4-A4抗体 0.1ml
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。