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2019-nCoV科研N基因RT-PCR试剂盒使用方法
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
FRA1/FOSL1 peptide VGLUT1/BNP1生长调节致癌基因gamma(GROγ)抗体
AIF (Apoptosis-Inducing Factor)VMAT2G蛋白信号调节蛋白2抗体
Adenylate Kinase 1 (AK-1)VHLG蛋白偶联受体GPR142蛋白抗体
Akt/PKBVANGL2调节蛋白GAL4抗体
CA153/MUC1/KL-6 peptidePhospho-VASP(Ser239)配子生成素结合蛋白1抗体
ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag)phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059)锌指蛋白403/喉癌相关蛋白1抗体
5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP)V.cholera Ogawa鸟苷酸环化酶α2/GCS-α-2抗体
5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A)VAMP-1+2+3G蛋白偶联受体7抗体
2019-nCoV科研N基因RT-PCR试剂盒COMMD9C1orf220人免疫抑制性糖蛋白免疫试剂盒
CAPD3Calcyphosine 1人免疫球蛋白重链可变区(IgHV)免疫试剂盒
phospho-Cdc6 (Ser54)Calcyphosine 2人免疫球蛋白重链(IgH)免疫试剂盒
Phospho-cdc2 (Ser39)phospho-CSEN (Ser63)人免疫球蛋白轻链lambda(λ-IgLC)免疫试剂盒
CA12C16orf61人免疫球蛋白轻链kappa(κ-IgLC)免疫试剂盒
CDC34BCNG3人免疫球蛋白结合蛋白(BIP)免疫试剂盒
CADM3CNGB3人免疫球蛋白γ-1 链C 区(IGHGI)免疫试剂盒
CD47c-Abl人免疫球蛋白M(IgM)免疫试剂盒
2019-nCoV科研N基因RT-PCR试剂盒特点:
操作简单,整个过程只需要20 min左右。
灵敏度高,RT-PCR检测病毒的最终灵敏度可以达到 50拷贝/ml。
安全无毒,不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液,也不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
最多可以处理1.5 ml液体病毒样品(但需要加上离心富集病毒的步骤)。
与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。