赭曲霉毒素检测试剂盒

赭曲霉毒素检测试剂盒概要

      赭曲霉毒素A是由曲霉菌和青霉属菌株产生的一种有毒真菌次级代谢产物，广泛存在于谷物及谷物产品、香料和咖啡豆等产品中。赭曲霉毒素A具有很强的肝脏和肾脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用，严重危害人类健康。赭曲霉毒素一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。而使用赭曲霉毒素ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中赭曲霉残留。赭曲霉毒素检测试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，能减少操作误差和工作强度。

    适合范围：赭曲霉毒素检测试剂盒可定性、定量检测玉米及玉米制品、大豆、燕麦等粮食作物样本中的赭曲霉毒素。

赭曲霉毒素检测试剂盒灵敏度：0.1ppb

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：1%三氯乙酸溶液

    称取1g三氯乙酸加去离子水100ml溶解。

配液2：复溶液

将5×复溶液用去离子水5倍稀释（1份5×复溶液加4份去离子水），用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

配液3:工作洗涤液

    将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 组织（鸡、鸭、猪肉/肝、虾、鱼）、鸡蛋样本处理方法

1）用均质器均质组织、肝脏、鸡蛋样本；

2）称取2±0.05g样本于50ml离心管中，加入4ml 1%三氯乙酸溶液，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；

3）取出250ul上清液,加入750ul复溶液混匀;

4）取50 μl用于分析。

    样本稀释倍数：8   检测下限：0.8ppb

5.3.2 蜂蜜样本处理方法

1）准确称取1±0.05g蜂蜜样本于离心管中，加入2ml 1%三氯乙酸，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；

2）取出100ul上清液于另一试管中，加入1900ul复溶液稀释，混合30s；

3）取50μl用于分析。

    样本稀释倍数：40    检测下限：4ppb

5.3.3 尿样本的处理方法

1）用复溶液将尿样10倍稀释（如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。

2）取50μl稀释的尿样用于分析。

    样本稀释倍数：10    检测下限：1ppb

6 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

实验开始前需配制标准品应用液；低浓度的标准品不稳定，需现配现用。

在0ppb的瓶中加复溶液3ml，0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb的瓶中分别加复溶液2ml，8.1ppb的瓶中加复溶液3ml。

标准液6：取1.0ppm高浓度标准品溶液24.3ul加入装有3ml 复溶液8.1ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为8.1ppb。

标准液5：取1ml标准液6加入装有2ml 复溶液2.7ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为2.7ppb。

标准液4：取1ml标准液5加入装有2ml 复溶液0.9ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为0.9ppb。

标准液3：取1ml标准液4加入装有2ml 复溶液0.3ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为0.3ppb。

标准液2：取1ml标准液3加入装有2ml 复溶液0.1ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为0.1ppb。

标准液1：直接使用复溶液，浓度即为0ppb。

6.1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6.2 加样反应：加标准品应用液或样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50μl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光反应30分钟。

6.3 洗    涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液350μl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6.4 加酶反应：加酶标记物100μl/孔，37℃避光反应30分钟。

6.5 洗    涤：同上

6.6 显    色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

6.7 终    止：加终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。

6.8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

7 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100，即

 百分吸光度值（%）＝A×100

A0

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

7.2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分