pCAMBIA1300植物表达质粒

pCAMBIA1300植物表达质粒

基本信息

启动子: 无，需要克隆进启动子才能表达

复制子: pVS1 oriV，ori

质粒大小: 8958bp

原核抗性: 卡那霉素Kan

筛选标记: 潮霉素HygR

克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 植物细胞

5'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT

3'测序引物: M13R

备注: 农杆菌介导

质粒简介

    The pCambia vector backbone is derived from the pPZP vectors. The pCambia1300 vector offers:1.high copy number in E.coli for high DNA yields2.pVS1 replicon for high stability in Agrobacterium 3.small siz 4.restriction sites for modular plasmid modifications and small but adequate polylinkers for introducing DNA of interest 5.bacterial selection with kanamycin 6. plant selection with hygromycin B

质粒图谱

pCAMBIA1300植物表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pCAMBIA1300植物表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。