pDC315腺病毒质粒
基本信息
启动子: MCMV promoter
复制子: pUC ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 病毒系列质粒;慢病毒类质粒;病毒表达质粒
质粒大小: 3913bp
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: pDC315-F:acgtgggtataagaggcg
3'测序引物: pDC315-R:cgatgctagacgatccag
质粒简介
pDC315质粒是一种真核表达质粒载体,将目的基因插入多克隆位点,转染细胞即可进行表达。 带有目的基因的 pDC315 可以通过插入位点两侧的酶切位点以及目的基因内部的特异酶切位点进行鉴定。
1. Ampr : 为质粒在 E.coli(如 DH5α)中扩增提供氨苄抗性(终浓度 100μg/ml)。
2. ori:质粒在 E.coli 中的复制起点。
3. Ad:Ad 序列,主要由 Ad 可以与 Ad 基因组质粒发生同源重组。
4. ITR:Ad 反向末端重复序列,是 Ad 基因组的包装识别信号。
5. MCMV:来自小鼠 CMV 病毒的立早启动子。
6. SV40 polyA:来自 SV40 病毒 T 抗原的 mRNA 加尾信号。
7. loxP:真核重组酶(Cre)的重组识别序列。
质粒图谱
pDC315腺病毒质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pDC315腺病毒质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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