pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒
基本信息
启动子: T7 promoter
复制子: pUC ori
质粒大小: 2792bp
原核抗性: 卡那霉素Kan
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
质粒简介
pUC57-sgRNA质粒是一个用于体外转录sgRNA的载体,gRNA片段可通过BsaI酶切连入,并在T7启动子的驱动下转录出来。
质粒图谱![pUC57-sgRNA.png pUC57-sgRNA.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/6ce35872-3493-4b8d-a4e3-00e31bf5d8ed.jpg)
pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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