pCAGGS哺乳表达质粒

pCAGGS哺乳表达质粒

基本信息

启动子: CAG promoter

复制子: SV40 ori，ori

终止子: β-globin poly(A) signal

质粒分类: 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；pCAG系列质粒

质粒大小: 4801bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp（100μg/ml）

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 293T等哺乳细胞

培养条件: 37℃，5%CO2

诱导方式: 无需诱导，瞬时表达

5'测序引物: pcaggs-F（GTTCGGCTTCTGGCGTGT）

3'测序引物: pcaggs-R（TATGTCCTTCCGAGTGAGAG）

质粒简介

         该质粒可用于在鸡b-肌动蛋白，兔b-球蛋白杂合启动子（CAG）的控制下高效表达基因，和各种哺乳动物细胞中的人CMV-IE增强子; CAG启动子序列由鸡b-肌动蛋白启动子，第一外显子和第一内含子的一部分（似乎具有强的增强子样活性），与兔b-珠蛋白片段连接，由第二内含子的3'部分 包括正常拼接反应所需的分支点）和第三外显子的5'部分。

         This plasmid is useful for highly efficient expression of genes under the control of the AG promoter and the human CMV-IE enhancer in various mammalian cells.The AG promoter sequence consists of the chicken β-actin promoter, the first exon and part of the first intron (that seems to have a strong enhancer-like activity) linked to a rabbit β-globin fragment, consisting of a 3' part of the second intron (inclusive a branch point which is required for normal splicing reactions) and a 5' part of the third exon.When cloning a fragment downstream from the lac promoter it may be advisable to use lacIq strains in order to prevent fortuitous expression of a possibly noxious polypeptide.

质粒图谱

pCAGGS哺乳表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pCAGGS哺乳表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。