pBV220大肠表达质粒

pBV220大肠表达质粒

基本信息

启动子: pR/pL

复制子: pUC ori

质粒分类: 大肠杆菌载体；蛋白表达质粒

质粒大小: 3666bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 30℃，有氧，LB

表达宿主: 大肠杆菌

培养条件: 30℃，有氧，LB

5'测序引物: pBV220-F: 5′-AAGAAGGGCAGCATTCAAAG-3‘

3'测序引物: pBV220-R: 5′-CTGCGTTCTGATTTAATCTG-3‘

备注: 温控表达质粒

质粒简介

pBV220质粒的SD sequence（用于结合原核生物核糖体的序列）后紧跟多克隆酶切位点，便于插入带起始ATG的外源基因，可表达非融合蛋白。

载体含有强的转录终止子可 防止出现"通读"现象，有利于质粒-宿主系统的稳定。

载体pBV220为3.7Kb，有利于增加其拷贝数及容量。pBV220含有PL启动子和编码对该启动子具有抑制作用而又对温度敏感的cI蛋白基因cIts857调控基因cI，因此可用温度对插入其中的外源基因的转录进行调控。

温控型原核表达载体，高拷贝数，大容量，强启动子，强转录终止子，可在任何受体菌中诱导表达。

pBV220载体是λPL/PR-cI857温度敏感系统表达载体，能够在42 ℃表达非融合的目的蛋白。

在利用pBV220载体进行质粒构建的时候，需要加入ATG起始密码子。

PBV220质粒属于温度诱导表达型，培养温度为30 ℃，诱导温度为42 ℃。

Ampr, 氨苄抗性基因;

ori, 质粒复制起点;

cIts857, lambda 噬菌体表达抑制基因，但是在热诱导条件下能够表达目的基因;

PRPL, 来自于lambda 噬菌体的串联的PR和PL启动子，保证基因的高水平表达;

SD, Shine-Dalgarno序列;

rrnB, 核糖体rrnB基因，是基因转录终止信号;

pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建的大肠杆菌温控表达载体,目前仍在广泛使用.

质粒图谱

pBV220大肠表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pBV220大肠表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。