pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning大肠敲除质粒
基本信息
别名: pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184
质粒图谱![pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning.png pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/f33250cd-1533-4b3b-8471-0420e5a5b650.jpg)
pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning大肠敲除质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning大肠敲除质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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