pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)

pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)

基本信息

复制子: OriS

质粒大小: 7507bp

原核抗性: 氯霉素Chl

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

备注: 细菌人工染色体BAC质粒

质粒简介

        随着基因组学时代的到来，克隆并利用生物的重要基因，研究这些基因的结构、功能和进化已成为遗传学领域的热点之一。生物体的许多重要性状都涉及到复杂的生理生化反应，受多基因或基因簇的控制，与成百上万碱基的DNA片段相关，此外，复杂基因组的物理作图和基因的图位克隆也涉及到大片段的研究，因此提高载体的容纳量一直是克隆载体的重要发展方向之一。

        目前比较理想的细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome，BAC）是指一种以F质粒（F-plasmid）为基础建构而成的细菌染色体克隆载体，命名为pBACs，其容量在50 - 300 kb之间，各种类型的pBACs在大肠杆菌都呈单拷贝。

        BAC是以大肠杆菌致育因子（F因子）为基础的合成载体。F因子也称为F质粒，是一种“性质粒”，它可将宿主当然体基因转移到另一宿主细胞。F因子在大肠杆菌中的复制受到严格控制而保持低拷贝，一般为每个细胞1-2个拷贝，其parB基因能够排斥细胞中的外源性F质粒，限制了细胞内质粒分子间的重排，降低了重组BAC中外源DNA的重排水平和嵌合度。此外，F因子具有携带1M bp插入片段的潜能，这就使构具有大容量克隆能力的BAC载体成为可能。

        BAC载体主要包括oriS，repE(控制F质粒复制）和parA、parB（控制拷贝数）等元件。以BAC为基础克隆的载体成嵌合体的频率较低，转化效率高，而且以环状结构存在于细菌体内，易于分离纯化，已被科学界广泛接受。目前主要用于大片段基因组文库的构建和大的基因簇（gene cluster）的相关研究，在各类生物基因组计划中发挥重要作用。

质粒图谱

pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。