pACYC184大肠克隆质粒

pACYC184大肠克隆质粒

基本信息

复制子: p15A ori

质粒分类: 大肠系列质粒；大肠克隆质粒；基因克隆质粒

质粒大小: 4245bp

原核抗性: 氯霉素Chl（25μg/ml）,四环素Tet（10μg/ml）

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

5'测序引物: Tcr-F（GAAGTCATGCGCCGGTTAAG）

3'测序引物: pBRrevBam-R (GGTGATGTCGGCGATATAGG)

备注: 丰富的酶切位点

质粒简介

        pACYC184质粒是一种原核表达载体，含有p15A复制起点的大肠杆菌质粒克隆载体。这允许pACYC184在与ColE1相容性组的质粒（例如pBR322，pUC19）的细胞中共存。它是一个低拷贝数载体，每个细胞约15个拷贝，但可以用壮观霉素放大。由于cat基因的存在，氯霉素不能用于提高质粒产量（阻碍菌体复制，不阻碍质粒扩增）。

        pACYC184 is an E. coli plasmid cloning vector containing the p15A origin of replication (1-4). This allows pACYC184 to coexist in cells with plasmids of the ColE1 compatibility group (e.g., pBR322, pUC19). It is a low copy number vector, at about 15 copies per cell (5), but can be amplifed with spectinomycin. Chloramphenicol cannot be used for amplifcation due to the presence of the cat gene.

质粒图谱

pACYC184大肠克隆质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pACYC184大肠克隆质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。